一、實驗介绍
早期的shRNA載體多採用RNA聚合酶III型啟動子介導shRNA的表達,RNA聚合酶III型啟動子如鼠源的U6啟動子和人源的H1啟動子可以在哺乳動物細胞中表達小分子RNA,隨著miRNA干擾機制的深入研究,發展出第二代siRNA載體,即採用RNA聚合酶II型啟動子CMW表達含測翼序列的miRNA模擬物,該載體模擬miRNA的加工,表達出來的shRNA進入RISC沉默複合物的效率要比RNA聚合酶III型啟動子表達的shRNA高十倍,抑制效率更好,且可以和EGP協調表達,方便觀察轉染效率
二、实验週期
30-35工作日
三、交付標準
>10ug shRNA載體,已確認shRNA目標基因轉染成功的細胞株,實驗報告,根據實驗要求,選擇蛋白質檢測或分子生物學檢測
四、客戶提供
目的基因NCBI登陸號
五、實驗流程
設計干擾靶點
構建干擾載體 培養293T細胞 靶基因表達豐度檢測
豐度高-內源篩選 干擾質粒轉染293T細胞 QPCR檢測干擾效果
豐度低-外源篩選 靶基因真核表達載體構建 干擾質粒與表達載體轉染293T細胞 QPCR檢測干擾效果