β-Mercaptoethanol 蛋白质电泳 是一种有机化合物，其化学式为HOCH2CH2SH，英文通用缩写为ME或βME。
它兼具乙二醇（HOCH2CH2OH）和乙二硫醇（HSCH2CH2SH）的官能团，为挥发性液体，具有较强烈的刺激性气味。
βME通常用于二硫键的还原，可以作为生物学实验中的抗氧化剂。它被广泛使用的原因是其具有的羟基使它能够溶解于水中，并且降低它的挥发性。
蛋白級(Protein Grade)产品及特点:
本产品用于将蛋白质的二硫键剪切成巯醇的温和的还原剂。也称为β- 巯基乙醇或BME。
经常加入到酶溶液中来防止由于半胱氨酸巯基氧化/ 二硫键形成造成的催化位点失活；经常作为添加的保护剂使用，终浓度为5 及20mM，含不含EDTA 均可。
操作步骤
（一）获得目的基因
1、通过PCR方法：以含目的基因的克隆质粒为模板，按基因序列设计一对引物（在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点），PCR循环获得所需基因片段。
2、通过RT-PCR方法：用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA，以mRNA为模板，逆转录形成cDNA第一链，以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。
（二）构建重组表达载体
1、β- 巯基乙醇，蛋白级(Protein Grade)载体酶切：将表达质粒用限制性内切酶（同引物的酶切位点）进行双酶切，酶切产物行琼脂糖电泳后，用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。
2、PCR产物双酶切后回收，在T4DNA连接酶作用下连接入载体。
（三） 获得含重组表达质粒的表达菌种
1、 将连接产物转化大肠杆菌DH5α，根据重组载体的标志（抗Amp或蓝白斑）作筛选，挑取单斑，碱裂解法小量抽提质粒，双酶切初步鉴定。
2、 测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确,进入下步操作。否则应筛选更多克隆，重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。
3、 以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。
（四）诱导表达
1、 β- 巯基乙醇， 蛋白级(Protein Grade)挑取含重组质粒的菌体单斑至2ml LB（含Amp50μg/ml）中37℃过夜培养。
2、按1∶50比例稀释过夜菌，一般将1ml菌加入到含50mlLB培养基的300ml培养瓶中, 37℃震荡培养至OD600≌0.4-1.0（*0.6，大约需3hr）。
3、取部分液体作为未诱导的对照组,余下的加入IPTG诱导剂至终浓度0.4mM作为实验组,两组继续37℃震荡培养3hr。
4、分别取菌体1ml, 离心12000g×30s收获沉淀，用100μl 1%SDS重悬，混匀, 70℃10min。
5、离心12000g×1min，取上清作为样品,可做SDS-PAGE等分析。
问题:蛋白质缓冲液中，使用β-Mercaptoethanol 或DTT的效果有什么不同？
β-巯基乙醇和DTT都是还原剂，防止蛋白质被氧化，β-巯基乙醇常用浓度为5-20MMOL/L，DTT为0.5-1MMOL/L。因为β-巯基乙醇加入缓冲液后24小时易被氧化，
其后加速蛋白质的失活，而DTT氧化后形成稳定的分子内二硫健，并不危及蛋白的巯基，所以在蛋白制备中常用β-巯基乙醇，而长期储存用DTT。
还有其上提到的试剂浓度均指终浓度。
问题:蛋白loading buffer中的belta 巯基乙醇會挥发?
是的，一般来说，loading buffer都是室温保存的，但其实β-Mercaptoethanol有很大挥发性，应当现用现配，就算是室温保存，
也不应当超过30天，超过30天后应当再补充β-Mercaptoethanol
