溴酚蓝(Bromophenol blue),生物学中常用的一种示踪染料、酸碱指示剂。作为示踪染料,本品可作为一种颜色标记用于核酸(琼脂糖)、蛋白质(聚丙烯酰胺)凝胶电泳;
作为一种pH指示剂,其有效指示范围在3.0-4.6,其颜色变化从黄色(pH3.0)到蓝紫色(pH4.6)。
作为指示剂,因为溴酚蓝呈蓝色,而蛋白质是白色,在SDS-凝胶中不明显,且溴酚蓝的相对分子量比蛋白质(绝大部分)小,
电泳时速度比蛋白质稍快,因此当溴酚蓝到达电泳槽底部(可看蓝色调带),则电泳结束。
配置方法:
方法1:1%的溴酚蓝
将托盘天平上称取1g溴酚蓝定溶于100ml无水乙醇中,转移入滴瓶中,贴标签备用。
方法2:0.05%的溴酚蓝
配western blot用的2*SDS上样缓冲液需要用到0.1%的溴酚蓝,2-DE中溴酚蓝一般也是配成0.1%母液。实际上,溴酚蓝在水中的溶解度不高,直接将0.1g溴酚蓝溶于100ml水是有困难的。下面是其较合适的配制方法:
0.05%的溴酚蓝配制方法:取溴酚蓝0.1g,加0.05mol/L氢氧化钠溶液3.0ml使溶解,再加水稀释至200ml,即得。 变色范围pH2.8~4.6(黄→蓝绿)。只是不知道加入NaOH会不会影响2-DE实验。估计影响不大,因为指示剂用量毕竟很少。
方法3:1%溴酚蓝
加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中,搅拌或涡旋混合直到完全溶解。溴酚蓝其钠盐易溶解在水里。
pH指示剂,pH=3.0时呈黄色,pH=4.6时呈蓝紫色。
酸碱指示剂;
非水滴定用指示剂,蛋白电泳染色;病毒化验等。