NP-40 裂解液(含抑制剂)是一种比较温和的细胞组织裂解液。NP-40 裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的 PAGE、Western、免疫沉淀(immunol precipitation,IP)、免疫共沉淀(co-IP)和ELISA 等。
本产品可以用于动物、植物的细胞或组织样品,也可以用于真菌或细菌样品。
NP-40 裂解液(含抑制剂)的主要成分为 50mM Tris(pH7.4),150mM 氯化钠,1% NP-40 以及焦磷酸钠,β-甘油磷酸酯,正钒酸钠,氟化钠,EDTA,亮肽素等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白降解。
【注意事项】:
1、为取得良好的使用效果,尽量避免过多的冻融。可以适当分装后使用。
2、需自备 PMSF,裂解样品的所有步骤都需在冰上或 4ºC 进行。
3、对于某些难溶解蛋白的 Western,如果发现 Western 及 IP 细胞裂解液 效果不是非常理想,可以尝试使用裂解强度更高的裂解液例如 RIPA 裂解液或 SDS 裂解液。
各种细胞裂解液的功用(SDS,NP-40,TritonX-100)
SDS,NP-40,TritonX-100这三种去垢剂的作用是不同的,或者说作用力量强弱不同。
SDS属于离子型去垢剂,最厉害,基本可以把细胞完全破掉,DNA会释放出来,裂解液变得很粘稠。
NP-40是很温和的去垢剂,1%浓度的基本可以破坏掉胞膜,而对核膜破坏的作用弱,结合特定的buffer可以获得胞浆蛋白。
TritonX-100的能力介于NP40和SDS 之间,偏向于NP40,也是常用的细胞裂解液成分之一,在保护蛋白活性方面有一定作用(SDS基本会使蛋白变性失活)。
因此去垢剂属性只是一方面,buffer、配比、浓度、提取方法和材料处理也都是关键因素,建议参考《分子克隆》来做。