用于细胞、组织提取物，增加蛋白稳定性

在平衡状态下内源性蛋白质产生并降解，因此在稳定的环境条件下其细胞水平是稳定的。

粗细胞提取物含有许多能够降解提取物中的蛋白质的内源酶，例如磷酸酶和蛋白酶。

当在体外从细胞和组织中提取蛋白质时，蛋白质产生被显著抑制，降解增加。

提高完整蛋白质产量的最佳方法是加入已知存在的那些酶的抑制剂。

蛋白酶抑制剂cocktail用于细胞裂解物或组织提取物以提高蛋白质的稳定性。

该cocktail起到抑制蛋白酶的作用，这种蛋白酶会降解非磷酸化或磷酸化

蛋白质底物。

该蛋白酶抑制剂cocktail包含单个组分，包括对半胱氨酸，丝氨酸，

酸性蛋白酶和氨基肽酶具有广泛特异性的AEBSF

Aprotinin，Bestatin，E-64，Leupeptin 和 Pepstatin A。

已经用哺乳动物细胞和组织提取物对这种蛋白酶抑制剂cocktail进行了优化和测试。

该蛋白酶抑制剂cocktail作为DMSO即用溶液提供。

主要用途:蛋白纯化，蛋白免疫印迹, 免疫(共)沉淀，蛋白质pull-down实验，免疫荧光，免疫组织化学，激酶测定等。

常見問題:

问题1: 为什么要用蛋白酶抑制剂Cocktail？

 
回答1: 蛋白酶抑制剂Cocktail是低毒，全面的蛋白保护试剂，最大限度地保护蛋白，使其免于被蛋白酶降解。目前生物学研究日渐深入，更多地将目标锁定为细胞中较为微量的蛋白，如信号通路蛋白、受体蛋白，采用coIP,Pull-down等方法获得样品。对于这些微量的珍贵样品，Cocktail能取得最佳的保护效果，比单一的抑制剂（如PMSF）更为可靠。

问题2: 蛋白酶抑制剂Cocktail能否稀释使用？

回答2: 蛋白酶活性抑制效果和很多因素有关，如目标蛋白降解的难易程度、蛋白酶的浓度、活性、抑制剂的浓度都会影响最后的保护效果。我们的蛋白酶抑制剂Cocktail采用经典浓度配比，确保对不同类型的蛋白酶都有充分的抑制效果。为了取得最好的保护效果，使用时应按照规定比例稀释，这是此类产品的共性。但实际产品里，不同厂商的标示清楚程度不同，有些友商的对稀释操作描述不严谨，很容易产生可以稀释使用的误导，需要仔细辨读，以免影响实验结果。在部分实验室实际应用中，也存在对于已知蛋白的成熟操作流程中减量使用cocktail的情况，对于这类应用，Bimake可对照同类产品的相同比例稀释使用，可以保证保护效果。

问题3: 实验中经常用PMSF来保护蛋白，蛋白酶抑制剂Cocktail和它比有什么优势？

回答3: PMSF是经典的丝氨酸蛋白酶抑制剂，以前被广泛应用于细胞裂解纯化蛋白过程。但由于PMSF在很多方面存在明显的缺点，逐步被保护效果更好，更安全的蛋白酶抑制剂Cocktail所取代。PMSF的毒性较高，因此在蛋白酶抑制剂中选用AEBSF作为其替代品。AEBSF的半致死量是2834mg/kg，而PMSF是200mg/kg，AEBSF安全域值超过PMSF十四倍多，同时有着相当的抑制效果，对于很多丝氨酸蛋白酶的抑制比PMSF更为迅速。PMSF的另一个缺点是易降解失效，它在水溶液中的半衰期是30min，在细胞裂解过程中很容易失效。而蛋白酶抑制剂Cocktail不但保护更加全面，而且效果更加持久。

问题4: 我应该选择哪种类型的蛋白酶抑制剂cocktail， 片剂还是溶液？

回答4: 在选择cocktail产品类型的时候我们需要注意一些细节问题。两种类型的产品都含有添加物。片剂中含有若干种公司专利的未经公开的医药成分， 而溶液型产品中含有溶剂成分DMSO。一般来说这些添加物是不会影响产品效果的。在工业生产中，溶液型产品较片剂来说需要的加工步骤少，因而质量好价格低。而片剂产品在储存和运输两个环节具有优势，片剂能够在4度储存而不需要零下20度。我们推荐使用溶液型产品，价格更低，有效的抑制剂成分含量更高，便于直接分装。

问题5: DMSO会不会对我的实验造成影响？

回答5: DMSO会影响实验结果的可能性很低。在生物科学领域DMSO被作为很多生物活性物质的溶剂，比如蛋白结晶和免疫共沉淀等要求较高的实验体系中DMSO也有应用。DMSO在室温下性质稳定，在低温条件下DMSO还是优秀的细胞冷冻保护剂。

问题6: 用了Cocktail，结果仍然不好是怎么回事？

回答6: 蛋白酶抑制剂Cocktail作用是保护蛋白免受蛋白酶降解威胁，提高蛋白得率。对于绝大多数蛋白，Cocktail都有很好的效果。如果还是出现蛋白得率低的情况，需要谨慎检查实验步骤和方案设计，最大限度发挥Cocktail作用，减少导致蛋白降解的环节。例如，细胞处理前，先要将裂解体系完全准备好，预先加入Cocktail并混匀，将要破碎的细胞，收集完后或从冰箱中取出后立即加入准备好的裂解液中，给予蛋白全程保护。