Protease Inhibitor Cocktail(蛋白酶抑制剂)
产品名称:Protease Inhibitor Cocktail
(不含 EDTA,100X DMSO 储液)
中文別名:蛋白酶抑制剂
产品编码:P023-1ml
用于细胞、组织提取物,增加蛋白稳定性
在平衡状态下内源性蛋白质产生并降解,因此在稳定的环境条件下其细胞水平是稳定的。
粗细胞提取物含有许多能够降解提取物中的蛋白质的内源酶,例如磷酸酶和蛋白酶。
当在体外从细胞和组织中提取蛋白质时,蛋白质产生被显著抑制,降解增加。
提高完整蛋白质产量的最佳方法是加入已知存在的那些酶的抑制剂。
蛋白酶抑制剂cocktail用于细胞裂解物或组织提取物以提高蛋白质的稳定性。
该cocktail起到抑制蛋白酶的作用,这种蛋白酶会降解非磷酸化或磷酸化
蛋白质底物。
该蛋白酶抑制剂cocktail包含单个组分,包括对半胱氨酸,丝氨酸,
酸性蛋白酶和氨基肽酶具有广泛特异性的AEBSF
Aprotinin,Bestatin,E-64,Leupeptin 和 Pepstatin A。
已经用哺乳动物细胞和组织提取物对这种蛋白酶抑制剂cocktail进行了优化和测试。
该蛋白酶抑制剂cocktail作为DMSO即用溶液提供。
注意:我司产品为非无菌包装,若用于细胞培养,请提前做预处理,除去热原细菌,否则会导致染菌。
主要用途:蛋白纯化,蛋白免疫印迹, 免疫(共)沉淀,蛋白质pull-down实验,免疫荧光,免疫组织化学,激酶测定等。
常見問題:
问题1: 为什么要用蛋白酶抑制剂Cocktail?
回答1: 蛋白酶抑制剂Cocktail是低毒,全面的蛋白保护试剂,最大限度地保护蛋白,使其免于被蛋白酶降解。目前生物学研究日渐深入,更多地将目标锁定为细胞中较为微量的蛋白,如信号通路蛋白、受体蛋白,采用coIP,Pull-down等方法获得样品。对于这些微量的珍贵样品,Cocktail能取得最佳的保护效果,比单一的抑制剂(如PMSF)更为可靠。
问题2: 蛋白酶抑制剂Cocktail能否稀释使用?
回答2: 蛋白酶活性抑制效果和很多因素有关,如目标蛋白降解的难易程度、蛋白酶的浓度、活性、抑制剂的浓度都会影响最后的保护效果。我们的蛋白酶抑制剂Cocktail采用经典浓度配比,确保对不同类型的蛋白酶都有充分的抑制效果。为了取得最好的保护效果,使用时应按照规定比例稀释,这是此类产品的共性。但实际产品里,不同厂商的标示清楚程度不同,有些友商的对稀释操作描述不严谨,很容易产生可以稀释使用的误导,需要仔细辨读,以免影响实验结果。在部分实验室实际应用中,也存在对于已知蛋白的成熟操作流程中减量使用cocktail的情况,对于这类应用,Bimake可对照同类产品的相同比例稀释使用,可以保证保护效果。
问题3: 实验中经常用PMSF来保护蛋白,蛋白酶抑制剂Cocktail和它比有什么优势?
回答3: PMSF是经典的丝氨酸蛋白酶抑制剂,以前被广泛应用于细胞裂解纯化蛋白过程。但由于PMSF在很多方面存在明显的缺点,逐步被保护效果更好,更安全的蛋白酶抑制剂Cocktail所取代。PMSF的毒性较高,因此在蛋白酶抑制剂中选用AEBSF作为其替代品。AEBSF的半致死量是2834mg/kg,而PMSF是200mg/kg,AEBSF安全域值超过PMSF十四倍多,同时有着相当的抑制效果,对于很多丝氨酸蛋白酶的抑制比PMSF更为迅速。PMSF的另一个缺点是易降解失效,它在水溶液中的半衰期是30min,在细胞裂解过程中很容易失效。而蛋白酶抑制剂Cocktail不但保护更加全面,而且效果更加持久。
问题4: 我应该选择哪种类型的蛋白酶抑制剂cocktail, 片剂还是溶液?
回答4: 在选择cocktail产品类型的时候我们需要注意一些细节问题。两种类型的产品都含有添加物。片剂中含有若干种公司专利的未经公开的医药成分, 而溶液型产品中含有溶剂成分DMSO。一般来说这些添加物是不会影响产品效果的。在工业生产中,溶液型产品较片剂来说需要的加工步骤少,因而质量好价格低。而片剂产品在储存和运输两个环节具有优势,片剂能够在4度储存而不需要零下20度。我们推荐使用溶液型产品,价格更低,有效的抑制剂成分含量更高,便于直接分装。
问题5: DMSO会不会对我的实验造成影响?
回答5: DMSO会影响实验结果的可能性很低。在生物科学领域DMSO被作为很多生物活性物质的溶剂,比如蛋白结晶和免疫共沉淀等要求较高的实验体系中DMSO也有应用。DMSO在室温下性质稳定,在低温条件下DMSO还是优秀的细胞冷冻保护剂。
问题6: 用了Cocktail,结果仍然不好是怎么回事?
回答6: 蛋白酶抑制剂Cocktail作用是保护蛋白免受蛋白酶降解威胁,提高蛋白得率。对于绝大多数蛋白,Cocktail都有很好的效果。如果还是出现蛋白得率低的情况,需要谨慎检查实验步骤和方案设计,最大限度发挥Cocktail作用,减少导致蛋白降解的环节。例如,细胞处理前,先要将裂解体系完全准备好,预先加入Cocktail并混匀,将要破碎的细胞,收集完后或从冰箱中取出后立即加入准备好的裂解液中,给予蛋白全程保护。