RNA 高效保存液(RNAwait)是一种无毒的可直接使用的样品储存液,
能使细胞内的 RNA 与 RNA 酶分离,可以快速可靠地保存动物组织、细胞内的 RNA。
组织获取后立即浸 入 RNAwait 保存液中,在室温可以保存 7 天,4℃可以保存 4 周,
-20℃、-80℃标本可以长期保存,RNA 稳定存在不降解,
取出后用各类方法抽提可以获得高质量的 RNA
15–25°C,保质期 2 年。
低温条件下有结晶析出时加热至 37°C 溶解后使用
注意事项:
1、组织和细胞取材速度要快,在获取后应当尽快浸入 RNAwait,以防止 RNA 降解。
2、冰冻组织不能用 RNAwait 保存,因为 RNAwait 不能有效渗入冰冻组织。
3、保存样品的 RNA 提取:样本从-20℃或-80℃冰箱取出后,复温到室温后,取出组织块,再用于提取 RNA。
细胞样本则复温后低速离心收集细胞,去除 RNAwait,再用于提取 RNA。
后继的处理(如组织匀浆)可以在室温下进行,不必在液氮中操作,RNA 仍能有效 得到保护。
残留少量 RNAwait 保存液不影响后继提取 RNA 的质量。
4、RNAwait 在动物组织(如大鼠肝脏,脾脏)和细胞(如 DH5α)RNA 的保护中效果 不错;
植物材料种类繁多,没能一一测试(烟草和拟南芥叶片中的 RNA 能被 RNAwait 有效 保护),建议预实验后再使用,
适用范围 :
●新鲜组织(动,植物);培养细菌,全血,血液
●需提采集多个样本,且采集时间、空间跨度较大;
●不方便马上提取 RNA而又没有液氮或超低温冰箱保存样品;
●室温下或只用冰的条件下长途运输样品。
操作流程:
1、根据要保存的各样本的体积,计算出所需 RNAwait 用量。RNAwait 的用量应当是组 织体积的 10 倍(100 mg 组织约用 1ml RNAwait);
离心收集 2×10 7细胞 RNAwait 的用量是 1ml。
加入 RNAwait 的原则是:量宁多勿少。
建议在实际操作中不要称量组织,而直接根据目测结果加入 RNAwait 量,以加快操作和减少污染。
例如 5mm 边长的立方体组织块,体积为 125mm3=125µl,故应当加入 1.25ml 的 RNAwait 液。
2、将 RNAwait 按需要量分装入自备保存管中;
3、快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm 的任意片状,较小的组织直接取下,立即完全浸 入 RNAwait 中。
注:组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则 RNAwait 不能有效渗入,组织中间部位的 RNA 不能受到保护。
较大的组织可以切成厚度<0.5 cm 的任意片状后保存,较小的组织
(如 大鼠的肾脏、脾脏,小鼠的大部分器官)则可以直接浸入 RNAwait。
4、保存时先将样本浸入 RNAwait 后置 4℃冰箱过夜
(注:4℃过夜是必需的,这样可 使 RNAwait 完全渗入到组织中),
然后转移到-20℃冰箱(RNAwait 在-20℃时仍为液态, 如有结晶析出,也是正常情况);
或者在 4℃冰箱过夜后,从 RNAwait 中取出组织块,将组织块转移到-80℃冰箱。
在 RNAwait 中保存的标本,反复冻融至室温 20 次不影响 RNA 的 质量