ReadyBlot™ Fast Western Transfer Buffer 10X(快速转印缓冲液)
产品名称:ReadyBlot™ Fast Western Transfer Buffer 10×
中文別名:快速转印缓冲液
产品编码:ZL001RB-1000ml
MDBio自主研发产品
本品为预先制配好的快速转印缓冲液,含散热因子配方
可承受400mA电流在30分钟即完成蛋白转印过程
(視转印目的蛋白分子量的大小来调整转印时间长短)
常温条件下转印,无须在冰浴条件下进行
可兼容适用于其他品牌制成的PAGE胶或电泳后的PAGE胶
搭配QuickRun能達到更好條带效果
适用于不同品牌转印设备,无须替换設備
未开封常温条件下保存五年
产品优点:
本配方缓冲液可以大大加快转印的速度,并且在转印过程中,不会产生大量热量,
不会导致蛋白变异或降解,不会破坏蛋白本身的完整性。
•快速: 相较传统方式的90分钟-4小时,此缓冲液可以将转印时间缩短到< 50分钟。
•兼容性: 可使用现有设备,适用所有的蛋白胶,湿转系统以及膜类型。
•转印效率高: 100% 转移6-240kD蛋白。
•工作液可重复使用3-5次。
注意:
1.具体转印时间需针对蛋白大小略微调整;不同厂家电源供应器的电阻所造成电压和电流失衡
需留意,我们所建议条件是400mA电流对应约为80-110V电压。
2.缓冲液可以反复利用,但每次使用的转印时间会改变缓冲液的离子浓度和PH值,因此重复使用
次数可观察缓冲液的澄清度及黏稠度;
3.反复利用的缓冲液須冷藏保存,以避免长菌;
4.不同蛋白大小所需转印时间不同,一般50KDa大小以内的目的蛋白约30分钟,50KDa-120KDa的
目的蛋白需要多加5-10分钟, 120KDa-180KDa的目的蛋白可再加5-10分钟
(以上僅供参考建议,实际要考虑目的蛋白在总蛋白中的含量浓度占比)
用于蛋白转印实验(将蛋白从胶上转移到PVDF膜上)
在WB过程中从SDS-PAGE胶上转移蛋白至膜上是非常关键的步骤
优化转移时间往往需要实验多次,如何保证蛋白完全转移技巧:
1.使用预染的marker:
预染marker能够直观的观察到跑胶情况,而且在转移过程中也是很好的工具,
在完成印迹后观察膜上的 marker 看是否所有条带都已经转移至膜上。
2.在转印装置中加两块膜:
小分子量的蛋白转移的比较快,为保证大分子蛋白的转印,长时间的转印可能使小分子蛋白透过膜,
可以加入两块膜,如果能在第二块膜上检测到小分子蛋白,说明转印时间过长。
3.在转印后对胶染色:
如果转印时间不够优化,通过对胶染色,在胶上能够观察到未转移完全的蛋白,
这种情况在转印大分子蛋白是常见,使用银染或者考马斯亮蓝的方法都可以。