ReScript^TMII Reverse Transcriptase是在M-MLV (RNase H-) Reverse Transcriptase基础上通过分子进化技术多点突变的新一代反转录酶，大幅度提高了稳定性和反转录效率。Rescript^TMII RT SuperMix for qPCR(+gDNA Eraser)适用于两步法qRT-PCR检测。试剂盒中的4×gDNA Eraser Mix可去除RNA模板中残留的基因组DNA，保证后续定量结果的准确性。5×ReScript^TMII RT SuperMix II中含有反转录第一链合成所需的所有组分（Buffer，dNTP Mixture，ReScript^TMII Reverse Transcriptase，RNase Inhibitor，Random 6 mers/Oligo (dT)Primer Mix），加入模板RNA和水即可迅速进行反应，同时终止gDNA Eraser作用，保证cDNA的完整性。

本试剂盒针对qPCR进行Random 6 mers/Oligo (dT)Primer的比例优化，使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始，并具有相同的反转录效率，最大程度保证了qPCR结果的真实性和可重复性。反转录产物兼容SYBR Green和探针法qPCR，可以根据实验目的，选择相应的试剂配合使用，进行高性能的基因表达分析。

 

 

注意事项 

 

1. 高质量的完整的RNA对于获得高质量的cDNA是至关重要的。实验前请用电泳验证RNA的完整性。 

2. 建议RNA是溶于水而不是TE中，因为TE中的EDTA会对反转录反应产生抑制。 

3. 20 µl反转录反应体系中，建议Total RNA加入不超过2 μg，mRNA不超过200 ng，否则加入RNA量过高，可能会超出后续qPCR的线性范围。 

4. 4×gDNA Eraser Mix、5×ReScript^TMII RT SuperMix II和5×No RTase Control Mix含有高浓度的甘油，粘度高，在使用前请短暂离心收集到离心管底部，并用移液枪轻轻吸打充分混匀后，准确吸取，并且不要使Tip插入液面过深，否则会因Tip壁粘着造成损失。 

5. 可以不经过基因组去除步骤，直接用5×ReScript^TMII RT SuperMix II进行反转录，这样所得到的结果会与使用ReScript^TMII RT SuperMix for qPCR相当。但是请勿将gDNA Eraser与其他试剂盒中的5×ReScript^TMII RT SuperMix配套使用，因其不含终止gDNA Eraser反应的成分，会影响反转录和后续的qPCR实验。 

6. cDNA产物仅适用于qPCR反应，如果下游实验进行基因克隆等长片段PCR扩增，可使用Rescript^TMII 1st Strand cDNA Synthesis Kit进行操作。

组成及包装量

   

组分	100 rxn (20 μl/rxn)
4× gDNA Eraser Mix	400 μl
5× ReScriptTM II RT SuperMix II	400 μl
5× No RTase Control Mix*	40 μl
RNase free H2O	2 × 1 ml

 

     

 

第一链cDNA合成。可用于高拷贝、低拷贝基因的qPCR分析。