Bicinchoninic acid (BCA )法是近来广为应用的蛋白定量方法。其原理与Lowery法蛋白定量相似，即在碱性环境下蛋白质与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+。BCA与Cu1+结合形成稳定的紫蓝色复合物，在562 nm处有高的光吸收值并与蛋白质浓度成正比，据此可测定蛋白质浓度。与Lowery法相比，BCA蛋白测定方法灵敏度高，操作简单，试剂及其形成的紫兰色复合物稳定性俱佳，并且受干扰物质影响小。与Bradford法相比，BCA法的显著优点是不受去垢剂的影响。
特点:
• 灵敏度高：最低可检测出25 μg/ml，0.5 μg蛋白
• 线性范围广：线性范围在25 ~2500 μg/ml
• 快速简便：45分钟内完成测定，比经典的Lowry法快4倍而且更加方便
• 兼容性强：不受样品中去垢剂等化学物质的影响
• 稳定性好：蛋白间检测变异系数远小于Bradford法
【注意事项】
1、如果检测效果不佳，可以室温放置 2h 或 60℃放置 30min，颜色会随着时间的延长不断加深。
显色反应也会随温度升高而加快；如果浓度较低，可以适当延长孵育时间或在较高温度下孵育。
2、测定标准曲线时发现随着标准品浓度的增加吸光度或颜色没有明显变化，可能的原因是样品中
含有严重干扰 BCA 法测定蛋白浓度的物质。
3、BCA 法检测中样本中不应含有 EDTA，否则影响检测结果。
4、因 BCA 法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，建议每次测定时都做标准曲线，并且显色
反应的速度和温度有关，所以除非精确控制显色反应的时间和温度，否则每次都做标准曲线。
5、如果没有酶标仪，也可以使用普通分光光度计测定，但应考虑根据比色皿的最小检测体积。
应按比例适当加大 BCA 工作液的用量使总体积不小于最小检测体积，样品和标准品的用量亦
相应按比例放大；使用分光光度计测定蛋白浓度时，可以测定的样品数量可能会显著减少。
6、为了加快 BCA 法测定蛋白浓度的速度可以适当加热，但是切勿过热，否则易失效。
7、为保证蛋白的精确定量，样品的提取和标准蛋白的配制最好选用相同的缓冲液，同时也要保证
两者检测条件的一致性。如果缓冲液本身就有较高的背景值，建议使用其他的方法测定。
