DAPI 10mg(4',6-二脒基-2-苯基吲哚二醋酸盐)
产品名称:DAPI 【Assay: ≥98% (HPLC and TLC)】
中文別名: 4',6-二脒基-2-苯基吲哚二醋酸盐
产品CAS :28718-90-3
产品编码:D001-10mg
DAPI,也称DAPI dihydrochloride,是一种常用的核酸染料,可以和双链DNA富含AT序列的小沟结合,产生比自身强20多倍的蓝色荧光。
和EB(ethidium bromide)相比,DAPI对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。DAPI也可对RNA进行染色,染色机理是其可以选择性嵌入“AU序列”并发出荧光。相比DAPI-dsDNA
(Ex/Em=358nm/461 nm),
DAPI-RNA具有较长的最大发射波长(500 nm),其荧光亮度仅有DAPI-dsDNA的20%。
尽管DAPI不能通过活细胞膜,但可以通过提高浓度使之进入活细胞。DAPI具有很高的光漂白承受水平,能用来检测酵母线粒体DNA,叶绿体DNA,病毒DNA,Microplasm DNA以及
染色体DNA。
DAPI典型的蓝色荧光特性使其非常普遍的搭配其他绿色、黄色或红色荧光染料用于细胞生物学多色荧光标记技术,因此也常作为核酸和染色体的复染剂用于细胞凋亡检测、RNA原位杂 交、直接或间接免疫检测等领域,其染色后可用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。
使用方法:
1. 配制工作液:
用双蒸水或PBS稀释母液,配制成所需要的工作的浓度(0.5-10 μg/mL)。
2. 固定的细胞或组织染色:
对于固定的细胞或组织样品,固定后,适当洗涤去除固定剂。DAPI染色通常在其他染色的最后进行。如果不需要进行其它染色,则直接进行DAPI 染色。
a) 对于贴壁细胞或组织切片:加入适量DAPI染色液,覆盖住样品即可。
b) 对于悬浮细胞:至少加入待测染色样品体积3倍的染色液,混匀。室温放置3-5分钟。
c) 吸除DAPI染色液,用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次,每次3-5分钟。
d) 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长360 nm,发射波长460 nm。
3. 活细胞或组织染色:
a) 细胞培养物中加入适量DAPI染色液,约1/10细胞培养基体积,必须充分覆盖住待染色的样品。通常对于六孔板一个孔需加入1 mL染色液,对于96孔板一个孔需加入100 μL染色液。
b) 在37℃培养细胞 10~20 分钟。
c) 用 PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。
d) 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长360 nm,发射波长460 nm。
DAPI,荧光颜色:蓝色;染细胞类型:活细胞和固定细胞;应用:
(1)DAPI是一种常用的可以穿透细胞膜蓝色荧光DNA染料,可对DNA 染色的细胞核染色试剂,其与DNA结合后可以产生比DAPI 自身强20多倍的荧光,而与单链DNA结合无荧光的增强。
(2)DAPI常用于细胞凋亡检测,染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI对双链DNA的染色灵敏度要高于EB和PI,荧光强度比Hoechst低,但光稳定性高于Hoechst。
(3)DAPI能快速进入活细胞中与DNA结合,因此DAPI对生物体而言,也被视为-种毒性物质与致癌物。使用过程中应注意操作与抛弃的处理程序。
使用PI单一染色观测培养细胞,只能表示细胞的坏死情况,而不是凋亡(当然晚期凋亡PI亦可着色)。
但是如果我们只是想知道细胞的死亡情况,而不是仔细区分坏死或凋亡,那么PI单一染色即可以。但是如果我们一定要认定细胞的凋亡,那么PI单一染色显然不够!
这个时候使用Abbkine的细胞状态检测系列产品,例如,TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒(细胞凋亡晚期),Annexin V/PI细胞凋亡检测试剂盒和线粒体膜电位分析试剂盒(JC-1)
(细胞凋亡早期)以及Caspase系列活性分析试剂盒(比色法)(细胞凋亡中期)。