Proteinase K (蛋白酶K)
产品名称:Proteinase K 【≥40 units/mg protein】
中文別名: 蛋白酶K
产品CAS :39450-01-6
产品编码:P010-100mg
蛋白酶K 英文名Proteinase K,一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶
pH 4-12的宽广范围内均有活性,SDS、尿素或EDTA存在条件下也很稳定。
相对分子量约29.3kDa,能够切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键,
用於生物样品内蛋白质的降解。
蛋白酶K基因来自林伯氏白色念球菌(Tritirachium album limber),通过酵母重组表达所得,达分子生物学级别。
储备液浓度:10-20mg/ml一般工作浓度为: 50-100µg/ml,
根据缓冲体系是否含SDS、尿素、pH、温度等因素确定具体的工作浓度。
產品特性:
1) CAS NO:39450-01-6
2) 来源:基因来源林伯氏白色念球菌,酵母重组表达
3) 纯度:≥99%,经脱色和色谱纯化去除RNA和DNA,检测不到其它杂酶活性。
4) 稳定性:pH 4-12的宽广范围内均有活性,反应温度介于0-75ºC,在SDS、尿素或EDTA存在条件下也很稳定。
5) 比活力:≥40U/mg 蛋白
6) 单位定义:在37℃,pH7.5的条件下,每分钟水解酪蛋白生成1µM酪氨酸时需要的酶量,定义为1个活性单位。
7) 失活方法:反应体系中加入PMSF或DFP抑制剂即可失活,65℃温育10-15min可部分失活。
8) 质量控制:
a)以λ DNA为底物,37ºC消化4小时以上,未检测到脱氧核糖核酸酶活性。
b)以λ DNA为底物,25ºC消化16小时以上,未检测到核糖核酸酶活性。
9) 稀释缓冲液:纯水或各型缓冲液(如20 mM Tris-HCL,pH 7.5)。根据需要,利用稀释缓冲液溶解成所需浓度。
10) 反应条件:反应缓冲液中37℃-56℃温育1h;推荐反应温度选择50- 55℃
蛋白酶K应用广泛,主要用于去除DNA和RNA制备中的核酸酶,也可用于非蛋白组分制备体系内降解蛋白质杂质,
比如DNA疫苗制备、肝素制备等。还可用于制备脉冲电泳的染色体DNA和蛋白质印迹实验。
蛋白酶K在原位杂交技术中通常用于杂交前的处理,它具有消化包围靶DNA蛋白质的作用,
以增加探针与靶核酸结合的机会,提高杂交信号.但蛋白酶K的浓度过高、消化时间过长或孵育温度过高时,
都会对细胞的结构有一定的破坏,导致组织切片的脱落,细胞核的消失,从而影响杂交结果.
EDTA缓冲液可以替代蛋白酶K的作用,解决上述出现的问题,并能达到理想的染色效果.
蛋白酶K用于破坏细胞裂解液中的蛋白质(组织,细胞的培养细胞)和核酸的释放,因为它能够非常有效地灭活DNA酶和RNA酶。