DTT即DL,中文名为二硫苏糖醇。分子式为C4H10O2S2,分子量为154.25,纯度>99%。
常用还原剂,有抗氧化作用。
DTT和巯基乙醇相比,作用相似,但DTT的刺激性气味要小很多,毒性也比巯基乙醇低很多。
DTT比巯基乙醇的浓度低7倍时,两者效果相近,但DTT价格略高一些。
是一种还原蛋白质S-S键的试剂;生化研究用作巯基保护剂;酶的专一性抑制剂;测定酶活力。
SDS-PAGE(SDS-变性聚丙烯酰胺凝胶电泳)时用的蛋白上样緩沖液中會含有DTT。其主要成份为SDS,DTT,溴酚蓝,缓冲盐溶液等。
SDS可与蛋白质结合使蛋白质-SDS复合物上带有大量的负电荷,这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖,消除了各种蛋白质本身电荷的差异;
SDS还可以断开分子内和分子间的氢键,破坏蛋白质分子的二级和三级结构。
DTT可断开半胱氨酸残基之间的二硫键,破坏蛋白质结构,消除了蛋白结构之间的差异。终无电荷及结构上差异的蛋白(亚单位),
电泳速度只是与其分子量大小有关。溴酚蓝用作电泳时的指示剂,可大概指示电泳结束的时间。
DTT的用途之一是作为巯基化DNA的还原剂和去保护剂。
巯基化DNA末端硫原子在溶液中趋向于形成二聚体,特别是在存在氧气的情况下。
这种二聚化大大降低了一些偶联反应实验(如DNA在生物感应器中的固定)的效率;
而在DNA溶液中加入DTT,反应一段时间后除去,就可以降低DNA的二聚化。
DTT也常常被用于蛋白质中二硫键的还原,可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。
但DTT往往无法还原包埋于蛋白质结构内部(溶剂不可及)的二硫键,这类二硫键的还原常常需要先将蛋白质变性
(高温加热或加入变性剂,如6M 盐酸胍、8M 尿素或1% SDS)。反之,根据DTT存在情况下,二硫键还原速度的不同,可以判断其包埋程度的深浅。