潮霉素B（Hygromycin B）是由吸水链霉菌（Streptomyces hygroscopicus）代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，
通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成，
从而杀死原核（如细菌）、真核（如酵母菌，真菌）和高等哺乳动物真核细胞。
大肠杆菌（ Escherichia coli.）来源的潮霉素抗性基因（hyg或hph），编码潮霉素B磷酸转移酶，
将潮霉素B转化成不具有生物活性的磷酸化产物，从而起到解毒作用。
针对这一原理，潮霉素B是一种非常有用的选择性标记，用来筛选和维持培养成功转染潮霉素抗性基因的原核或者真核细胞。
另外，由于作用模式的差异，常与G418 (GeneticinTM)，Zeocin™ 和Blasticidin S联合使用进行双抗性阳性细胞株的选择。
潮霉素B还能用作抗病毒剂，因其选择性渗透进入因病毒感染增强通透性的细胞，且具有抑制翻译的功效。
还可混合入动物饲料中起到驱虫功能。
本品是无菌的潮霉素B溶液（100mg/mL in PBS buffer），可直接用培养液稀释使用。
1. 常用筛选浓度
潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，
推荐使用浓度为50-1000 μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线（kill curve）
即剂量反应性曲线，来确定*筛选浓度。
一般而言，哺乳动物细胞50-500 μg/mL；细菌/植物细胞20-200 μg/mL；真菌300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
【注意事项】：
为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素*浓度，
可通过建立杀灭曲线（剂量反应曲线）来实现，至少选择5个浓度。
1）第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜。
【注】：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。
2）根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。
以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000 μg/mL。
先用去离子水或者PBS buffer按照比例将母液稀释，然后稀释到相应浓度的工作液。
3）第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4）接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5）按照固定的周期（如每2天）进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。
选择在理想的天数（通常是7-10天）内能够杀死绝大多数细胞的*浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3. 稳定转染细胞的筛选
1）转染48 h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞（直接传代或者稀释后传代）。
【注】：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤效果*。则当细胞过于稠密，其效率会降低。
为了得到较好的筛选效果，*将细胞稀释至丰度不超过25%。
2）每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3）筛选7天后观察并评估细胞*（集落）的形成情况。
集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。
4）挑取并转移5-10个抗性*于35 mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5）之后更换正常培养基培养即可。
抗生素一般是指抵抗微生物的药物，以其功效作用分类，有抑制细菌生长及刹灭细菌的抗生素，但一般以其化学结构分类
大致上分类如下：
青霉素类
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Amoxicillin（阿莫西林）
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Ampicillin sodium（安比西林钠）
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Apalcillin（阿帕西林）
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Azlocillin（阿洛西林）
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Benzathine Benzylpenicillin（长效青霉素，比西林）
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Benzylpanicillin potassium（青霉素，青霉素钾）
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Carbeicillin sodium（卡比西林）
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Cloxacillin sodium（氯唑西林钠）
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Dicloxacillin sodium（双氯西林钠）
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Furbenicillin
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Mecillinam， Amidinocillin（美西林）
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Methicilline sodium（甲氧西林，甲氧苯青霉素）
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Mezlocillin（美洛西林）
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Oxacillin sodium（苯唑西林钠，新青霉素II）
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Penicillin G sodium， Benzylpanicillin sodium（青霉素，盘尼西林）
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Penicillin V（青霉素V）
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Piperacillin sodium
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Procaine benzylpenicillin（普鲁卡因青霉素）
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Sulbenicillin sodium, Kedacillin
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Temocillin（替莫西林）
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Ticarcillin disodium（替卡西林钠）
头孢菌素类
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Aztreonam（氨曲南）
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Cefacetrile sodium（头孢赛曲）
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Cefaclor（头孢克罗）
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Cefadine（头孢拉定）
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Cefadroxil（头孢羟氨苄）
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Cefalexin（苯甘头孢菌素）
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Cefamandole（头孢孟多）
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Cefapirin（头孢匹林）
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Cefatrizine（头孢曲秦）
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Cefathiamidine（头孢硫月米）
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Cefazolin sodium（头孢唑林钠）
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Cefdinir（头孢地尼）
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Cefmenoxime
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Cefmetazole（头孢美唑）
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Cefminox（头孢米诺）
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Cefodizime（头孢地秦）
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Cefoperazone
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Cefotaxime
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Cefotetan（头孢替坦）
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Cefotiam（头孢替安）
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Cefoxitin（头孢西丁）
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Cefpirome（头孢匹罗）
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Cefpodoxime proxetil
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Cefsulodin
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Ceftazidime（头孢塔齐定）
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Cefteram（头孢特仑）
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Ceftibuten（头孢布烯）
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Ceftizoxime
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Ceftriaxone（头孢曲松）
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Cefuroxime
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Cefuroximeaxetil
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Cefuzonam（头孢唑南）
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Cephaloridine（头孢利素I）
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Cephalothin sodium（头孢菌素I）
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Clavulanic acid（克拉维酸）
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Flomoxef（氟氧头孢）
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Imipenem（亚胺培南）
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Latamoxef sodium（拉氧头孢）
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Sulbactam（舒巴坦）
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Thienamycin（硫霉素）
磷霉素类
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Fosfomycin，Fosmicin（磷霉素，福赐美仙）
万古霉素类
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Norvancomycin（去甲万古霉素）
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Vancomycin hydrochloride（盐酸万古霉素）
利福霉素类
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Rifampin（利福平）
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Rifamycin SV（利福霉素SV）
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Rifandin（利福定）
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Rifapentine（利福喷汀）
多粘菌素类
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Polymyxin B（多粘菌素B）
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Polymyxin E sulfate（硫酸多粘菌素E）
氨基糖类
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Amikacin sulfate（硫酸阿米卡星）
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Astramicin A， Astromycine， Fortimicin A（阿司米星）
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Dibekacin（地贝卡星）
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Gentamycin sulfate（硫酸庆大霉素）
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Isepamicin（异帕米星）
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Kanamycin sulfate（硫酸卡那霉素）
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Micronomicin（小诺米星）
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Neomycin sulfate（硫酸新霉素）
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Ribostamycin（核糖霉素）
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Sisomicin（西索米星）
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Spectinomycin hydrochloride， Trobicin（盐酸大观霉素）
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Streptomycin sulfate（硫酸链霉素）
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Tobramycin（妥布霉素）
四环素类
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Chlortetracyclin hydrochloride（盐酸金霉素）
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Doxycycline hydrochloride（盐酸多西环素）
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Metacycline hydrochloride（盐酸美他环素）
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Minocycline（米诺环素）
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Oxytetracycline hydrochloride（盐酸土霉素）
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Tetracycline hydrochloride（盐酸四环素）
大环内酯类
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Azithromycin（阿奇霉素）
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Clarithromycin（克拉霉素）
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Dirithromycin（地红霉素）
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Erythromycin（红霉素）
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Erythromycin estolate（依托红霉素）
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Josamycin（交沙霉素）
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Kitasamycin， Leucomycin（吉他霉素）
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Meleumycin（麦白霉素）
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Medecamycin（麦迪霉素）
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Medecamycin acetate（醋酸麦迪霉素）
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Rokitamycin（罗他霉素）
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Roxithromycin（罗红霉素）
氯胺苯醇类
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Chloramphenicol（氯霉素）
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Chloramphenicol palmitate（氯霉素棕榈酸酯）
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Thiamphenicol（硫霉素）
林可霉素类
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Clindamycin hydrochloride（盐酸克林霉素）
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Lincomycin hydrochloride（盐酸林可霉素）
作用机制：
潮霉素B是由吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过抑制蛋白质合成而杀死细菌、真菌和高等真核细胞。
潮霉素B通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成。目前常用于筛选和维持培养含潮霉素抗性基因的原核或真核细胞。
抗性基因：
对潮霉素B的抗性源自编码潮霉素B磷酸转移酶（Hph）的基因。至今发现两种来源：
► Streptomyces hygroscopicus产生的Hph抗性基因；
► Escherichia coli，Klebsiella pneumoniae内质粒携带的Hph抗性基因（常用）
生物应用：
1）筛选和维持培养稳定转染Hph+载体的原核细胞或真核细胞（植物细胞和哺乳动物细胞）；
2）由于作用模式的差异，常与G418 (GeneticinTM)，Zeocin™ 和blasticidin S联合使用，筛选稳定转染两个不同载体的细胞株；
3）抗病毒剂，由于潮霉素B选择性渗透进入因病毒感染增强通透性的细胞，而且具有抑制翻译的功效；
4）作为驱虫药加入动物饲料；
应用浓度：
潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化。推荐使用浓度为50-1000 μg/mL，最佳浓度需要杀灭曲线来确定。
哺乳动物细胞·200-500 μg/mL；细菌/植物细胞·100-300 μg/mL；真菌·300-1000 μg/mL；
