在细胞培养体系中,血清是唯一不属于人工合成的成分,同时也让血清成分成为細胞培養體系中最大的不確定因素,因此如何选择合适的血清是细胞培养得好坏的决定性因素之一。根据采血时机的不同,牛血清可分为胎牛血清(Fetal Bovine Serum,FBS)、新生牛血清和小牛血清,我们细胞培养中一般使用的是胎牛血清,也是最为(干净),营养最为丰富的血清。
胎牛血清是在母牛怀孕3-8个月时,通过胎牛心脏穿刺采血获得新鲜的胎牛全血,经自然层析、离心后收集得到去除血细胞、纤维蛋白等成分的淡黄色透明上清液体,并在生产过程使用多级高置流膜过滤技术和三级0.1µm终端微滤方法处理而获取的血清。相比于新生牛和小牛血清,胎牛血清中所含的抗体、补体等对细胞有伤害的成分最少,因此对于一些较“脆弱”的细胞如干细胞、原代细胞,一定要使用优质的胎牛血清进行培养。
MDBio公司旗下在美國創建品牌ACTGene胎牛血清,每一批原材料都经过严格筛选,所有产品均在经欧洲药品质量管理局(EDQM)认证的GMP车间生产,其生产采用三步滤菌处理法,最后的过滤步骤为连续通过三个100nm的过滤膜,并经过严格的病原性病毒检测,无病原性病毒(BVDV,IBRV,BPIV3);
胎牛血清要求:
1、性状、外观:浅黄色澄清、无溶血、无异物稍粘稠液体。
2、蛋白质含量:3.5%~5.0%( w/v)
3、血红蛋白含量:≤ 0.02%( w/v)
4、无菌检验:阴性
5、支原体检验:阴性
6、细菌内毒素:≤5(EU/ml)
7、牛腹泻病毒:阴性
8、大肠杆菌噬菌体:阴性
9、支持细胞增殖:(Sp2/0-Ag14) 生长曲线 (接种浓度)最大增殖浓度 ≥2.5×106个/ml,细胞倍增时间:≤15h,克隆率:≥85%
1、提供对维持细胞指数生长的激素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物;
2、提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等,能结合或调变它们所结合的物质活力;
3、有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用;
4、是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源;
5、起酸碱度缓冲液作用。 6、提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害;