注意：可用于细胞培养，已提前预处理，除去热原细菌。

 

潮霉素B（Hygromycin B）是由吸水链霉菌（Streptomyces hygroscopicus）代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，

通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成，

 

从而杀死原核（如细菌）、真核（如酵母菌，真菌）和高等哺乳动物真核细胞。

大肠杆菌（ Escherichia coli.）来源的潮霉素抗性基因（hyg或hph），编码潮霉素B磷酸转移酶，

 

将潮霉素B转化成不具有生物活性的磷酸化产物，从而起到解毒作用。

 

针对这一原理，潮霉素B是一种非常有用的选择性标记，用来筛选和维持培养成功转染潮霉素抗性基因的原核或者真核细胞。 

 

另外，由于作用模式的差异，常与G418 (GeneticinTM)，Zeocin™ 和Blasticidin S联合使用进行双抗性阳性细胞株的选择。   

 

潮霉素B还能用作抗病毒剂，因其选择性渗透进入因病毒感染增强通透性的细胞，且具有抑制翻译的功效。

 

还可混合入动物饲料中起到驱虫功能。

本品是无菌的潮霉素B溶液（100mg/mL in PBS buffer），可直接用培养液稀释使用。

 

1. 常用筛选浓度

潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，

 

推荐使用浓度为50-1000 μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线（kill curve）

 

即剂量反应性曲线，来确定*筛选浓度。

 

一般而言，哺乳动物细胞50-500 μg/mL；细菌/植物细胞20-200 μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

 

2. 杀灭曲线的建立

【注意事项】：

为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素*浓度，

 

可通过建立杀灭曲线（剂量反应曲线）来实现，至少选择5个浓度。

1）第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜。

【注】：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。

2）根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。

 

以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000 μg/mL。

 

先用去离子水或者PBS buffer按照比例将母液稀释，然后稀释到相应浓度的工作液。

 

3）第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。

4）接下来每3-4天更换新的含药物培养基。

5）按照固定的周期（如每2天）进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。

 

选择在理想的天数（通常是7-10天）内能够杀死绝大多数细胞的*浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。

3. 稳定转染细胞的筛选

1）转染48 h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞（直接传代或者稀释后传代）。

 
【注】：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤效果*。则当细胞过于稠密，其效率会降低。

 

为了得到较好的筛选效果，*将细胞稀释至丰度不超过25%。

2）每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。

3）筛选7天后观察并评估细胞*（集落）的形成情况。

 

集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。

4）挑取并转移5-10个抗性*于35 mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。

5）之后更换正常培养基培养即可。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

作用机制：

 
潮霉素B是由吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过抑制蛋白质合成而杀死细菌、真菌和高等真核细胞。

潮霉素B通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成。目前常用于筛选和维持培养含潮霉素抗性基因的原核或真核细胞。

抗性基因：

对潮霉素B的抗性源自编码潮霉素B磷酸转移酶（Hph）的基因。至今发现两种来源：

► Streptomyces hygroscopicus产生的Hph抗性基因；
► Escherichia coli，Klebsiella pneumoniae内质粒携带的Hph抗性基因（常用）

生物应用：

1）筛选和维持培养稳定转染Hph+载体的原核细胞或真核细胞（植物细胞和哺乳动物细胞）；

2）由于作用模式的差异，常与G418 (GeneticinTM)，Zeocin™ 和blasticidin S联合使用，筛选稳定转染两个不同载体的细胞株；

3）抗病毒剂，由于潮霉素B选择性渗透进入因病毒感染增强通透性的细胞，而且具有抑制翻译的功效；

4）作为驱虫药加入动物饲料；

应用浓度：

潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化。推荐使用浓度为50-1000 μg/mL，最佳浓度需要杀灭曲线来确定。

哺乳动物细胞·200-500 μg/mL；细菌/植物细胞·100-300 μg/mL；真菌·300-1000 μg/mL；

 

常用的科研用途抗生素

我公司提供一系列常用的科研用途抗生素，现货供应，可提供大包装，满足用户多重需求

1、作用机理：干扰细胞膜合成（Cell Membrane Syntesis）

产品名称	货号	CAS	作用机理
达托霉素(Daptomycin)		103060-53-3	与细胞质膜结合，通过与其相互作用引起构象变化，破坏质膜功能。
硫酸多粘菌素B（Polymyxin B Sulphate）	P019	1405-20-5	与细菌脂多糖的脂质A部分结合，诱导膜孔形成，干扰质膜通透性。
硫酸粘杆菌素 Colistin Sulfate (Polymyxin E)	C018	1264-72-8	与革兰氏阴性菌质膜的脂质结合，从而破坏细胞膜完整性

 

2、作用机理：干扰细胞壁合成（Cell Wall Syntesis interference）

产品名称	货号	CAS	作用机理	主要应用
氨苄青霉素钠，Ampicillin, Sodium Salt	A010	69-52-3	β-内酰胺类抗生素，促使细菌细胞膜内层的转肽酶失活，从而抑制细菌细胞壁合成	分子生物学筛选抗生素
羧苄青霉素二钠盐，Carbenicillin, Disodium Salt	C002	4800-94-6	β-内酰胺类抗生素，促使细菌细胞膜内层的转肽酶失活，从而抑制细菌细胞壁合成	分子生物学筛选抗生素
噻孢霉素钠，Cefotaxime Sodium Salt	C003	64485-93-4	通过与青霉素结合蛋白（PBPs）结合来阻止肽聚糖合成过程中zui后一步转肽的发生，进而抑制细胞壁合成	植物培养抑制农杆菌污染
头孢西丁钠，Cefoxitin Sodium Salt		33564-30-6	第二代头孢菌素类抗生素，通过抑制细菌细胞壁合成来杀灭细菌。
Bacitracin杆菌肽		1405-87-4	多肽抗生素，通过抑制脂质焦磷酸去磷酸化，来抑制细菌细胞壁合成
青霉素G钠盐，Penicillin G, Sodium Salt	P013	69-57-8	β-内酰胺类抗生素，促使细菌细胞膜内层的转肽酶失活，从而抑制细菌细胞壁合成	防止真核细胞培养污染
盐酸万古霉素，Vancomycin Hydrochloride	V002	1404-93-9	糖肽类抗生素，干扰细胞壁合成

 

3、作用机理：干扰或抑制蛋白合成（Protein Syntesis interference or inhibition）

产品名称	货号	CAS	作用机理	主要应用
硫酸安普霉素（阿布拉霉素），Apramycin Sulfate	A011	65710-07-8	氨基糖苷类抗生素，通过阻断转位来抑制蛋白合成
Blasticidin S  杀稻瘟菌素S（灭瘟素）	B005	3513-03-9	核苷肽类抗生素，主要通过干扰核糖体中肽键的形成来特异性抑制原核和真核细胞的蛋白质合成。	细胞生物学，筛选抗生素
Chloramphenicol 氯霉素	C007	56-75-7	抑制50S核糖体亚基转肽酶步骤的翻译过程
Doxycycline Hyclate  盐酸强力霉素	D041	24390-14-5	与30S核糖体亚基结合，干扰tRNA/mRNA相互作用，zui终抑制蛋白合成。	Tet-on/Tet-off系统效应物
硫酸庆大霉素，Gentamycin Sulfate Salt	G005	1405-41-0	与30S核糖体亚基结合导致密码子错读，阻断肽酰-tRNA从受体位到供体位的转位，进而抑制细菌蛋白质的合成。
硫酸卡那霉素，Kanamycin Sulfate	K001	25389-94-0	氨基糖苷类抗生素，与70S核糖体亚基结合来抑制转位和诱发密码错编	分子生物学筛选抗生素
Erythromycin 红霉素	E003	114-07-8	大环内酯类抗生素，结合与50S核糖体亚基，阻断新生多肽链的延伸，从而抑制细菌蛋白质合成。
Roxithromycin 罗红霉素	R007	80214-83-1	与细菌核糖体50S亚基结合，抑制多肽转位，进而阻断蛋白质合成。
盐酸四环素，Tetracycline Hydrochloride	T009	64-75-5	穿透细胞膜上的质子通道，进入细胞后与30S核糖体结合，通过阻止氨基酰-tRNA转移到mRNA-核糖体复合物上的受体部位（A部位），从而抑制蛋白质的合成	分子生物学筛选抗生素
Neomycin Sulfate 硫酸新霉素	N005	1405-10-3	与引起错编的 30S 和 50S（有时为 50S）亚基结合；抑制蛋白质合成的开始和延长。	细胞生物学筛选抗生素
嘌呤霉素盐酸盐，Puromycin Dihydrochloride	P012	58-58-2	氨基糖苷类抗生素，作为氨酰-tRNA分子3’末端的结构类似物，能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸肽链中，导致肽链合成的*终止，进而阻止蛋白质合成。	细胞生物学筛选抗生素
盐酸壮观霉素，Spectinomycin Dihydrochloride	S005	22189-32-8	与细菌核糖体30S亚基结合，干扰肽酰tRNA转位从而抑制蛋白质合成（延伸）	植物细胞研究筛选抗生素
硫酸链霉素，Streptomycin Sulfate	S007	3810-74-0	氨基糖苷类抗生素，与30S核糖体亚基上的S12蛋白结合，导致mRNA序列错读和转位抑制，进而抑制细菌蛋白质合成。	防止真核细胞培养污染
Thiostrepton 硫链丝菌素		1393-48-2	多肽抗生素，防止延伸因子G和 GTP结合到50S核糖体亚基

 

4、作用机理：结合麦角甾醇或抑制生物合成的抗真菌剂（Antifungals that binds ergosterol or inhibit biosynthesis）

产品名称	货号	CAS	作用机理	主要应用
两性霉素B，Amphotericin B	A009	1397-89-3	多烯类抗真菌抗生素，结合真菌细胞膜上的固醇、主要为麦角甾醇。在膜上形成孔道，导致小分子泄露。	抗真菌剂，防止真核细胞培养污染
Fluconazole 氟康唑		86386-73-4	干扰真菌麦角甾醇合成和下调金属硫蛋白基因。
Nystatin 制霉菌素		1400-61-9	通过与甾醇结合提高敏感真菌的细胞膜通透性。

 

5、作用机理：干扰DNA、RNA或蛋白合成（Interferes with DNA, RNA, or Protein Synthesis）

产品名称	货号	CAS	作用机理	主要应用
Cordycepin 虫草素		73-03-0	转化为虫草素5’-三磷酸，通过poly（A）聚合酶插入核酸，由于缺乏3’-OH导致链合成终止。
盐酸环丙沙星，Ciprofloxacin Hydrochloride		86393-32-0	氟喹诺酮抗菌素，靶向DNA促旋酶和拓扑异构酶来抑制DNA解链。	防止支原体污染
Enrofloxacin 恩诺沙星		93106-60-6	喹诺酮羧酸衍生物，抑制DNA促旋酶活性。
Hygromycin B 潮霉素B	H004	31282-04-9	阻断多肽合成和抑制延伸。	细胞生物学，筛选抗生素
Nalidixic Acid 萘啶酸		389-08-2	喹诺酮类抗生素，抑制或调节细菌DNA促旋酶依赖的过程比如DNA聚合，ATP依赖的DNA超螺旋和染色体片段化。
新生霉素钠盐，Novobiocin Sodium Salt	N008	1476-53-5	氨基香豆素类抗生素，通过竞争性抑制原核DNA促旋酶和真核DNA拓扑异构酶活性来阻断DNA合成，zui终导致细胞死亡。
腐草霉素，Phleomycin		11006-33-0	阻断细胞进入S周期	细胞生物学，筛选抗生素
硫酸巴龙霉素，Paromomycin Sulfate		1263-89-4	通过与16S rRNA结合，抑制蛋白合成中的起始和延伸步骤	植物转化筛选抗生素
Rifampicin 利福平	R004	13292-46-1	靶向结合DNA依赖性的RNA聚合酶β-亚基，从而抑制RNA合成的开始	植物转化筛选抗生素

 

6、其他抗真菌化合物（Additional Antifungal Compounds）

 

产品名称	货号	CAS	作用机理	主要应用
Anisomycin 茴香霉素		22862-76-6	通过抑制真核核糖体的多肽转移酶活性来抑制蛋白合成。
巴佛洛霉素A1，Bafilomycin A1		88899-55-2	动物细胞、植物细胞和微生物V-ATPase特异抑制剂
硫酸诺尔斯菌素，Nourseothricin (NTC) Sulfate		96736-11-7	抗真菌剂，有效抑制白色念珠菌	酵母菌筛选抗生素
Oligomycin 寡霉素	O002	1404-19-9	大环内酯抗生素，抑制线粒体ATPase和磷酰基转移。
Tunicamycin 衣霉素	T019	11089-65-9	抗细菌和抗真菌剂。抑制N-乙酰基-1-磷酸转移酶（GPT）活性，以及防止糖蛋白合成中的N-糖苷连接形成。	抗细菌和抗真菌剂，糖蛋白合成研究