考马斯亮蓝（Coomassie brilliant blue）是两种相似三苯甲烷染料的总称，有G250和R250两种，结构上前者比后者多了2个甲基，命名上“G”为Green 的缩写，因G250的蓝色染料泛浅绿色；命名上“R”为Red的缩写，因R250的蓝色染料呈微红色调；“250”表示考马斯亮蓝的纯度。生化实验中常将考马斯亮蓝用于蛋白定量和蛋白电泳中蛋白染色。工作原理是：通过与蛋白质内的氨基和羧基基团间的静电结合作用以及范德华力，考马斯亮蓝与蛋白质形成强但非共价键连接的复合物。蛋白-染料复合物的形成稳定染料携带的负电荷阴离子（如磺酸基），从而产生在膜上或者胶上肉眼可见的蓝色。

考马斯亮蓝R250（Coomassie brilliant blue R250）更多用于电泳蛋白的染色，染色灵敏度比氨基黑高5倍，可达0.1 µg蛋白。但是染色背景比较深，需要褪色后才能进行蛋白条带的观察。考马斯亮蓝G250对蛋白胶染色的灵敏度相对较差，最低检测到0.5 µg蛋白。但是因其在三氯乙酸中不溶而以胶体形式存在，选择性的和蛋白质结合形成复合物，染色迅速，着色深的蛋白质条带数秒内可以显现出来，约45 min后着色最深。而且染色背景低，不需要脱色即可进行蛋白条带的观察。因此，非常适合对电泳凝胶蛋白的快速定性分析。

考马斯亮蓝G250较多的用于溶液体系中蛋白的定量分析，即Bradford蛋白结合检测法（Bradford protein-binding assay），此方法利用的就是G250与蛋白质结合的特性，Bradford试剂（也就是酸化的G250溶液）为阳离子，主要为双质子化，溶液为红色，其最大吸收波长（Amax）为470 nm。当与蛋白稳定结合后，G250以阳离子，非质子化的形式存在，溶液变为蓝色，最大吸收波长迁移到595 nm。蓝色阳离子形式染料的量与样本中蛋白的量成正比，因此通过直接测定595 nm的吸光度来反映蛋白量。此法的优点在于G250与蛋白质结合所需的时间较短（约2 min左右），且结合的G250-蛋白质复合物室温下约1 h内保持稳定。反应灵敏度高，是一种非常常用的微量蛋白快速定量方法。

考马斯亮蓝R250（Coomassie brilliant blue R250）。λmax=560―590nm。染色灵敏度比氨基黑高5倍。尤其适用于SDS电泳微量蛋白质染色。它与不同蛋白质结合呈现出基本相同的颜色，并且在比较宽的范围内，扫描峰的面积与蛋白量呈线性关系。但蛋白质浓度超出一定范围时，对高浓度蛋白的染色不符合Beer定律，用作定量分析时要注意这点。

考马斯亮蓝R250 和G250在用途上有什么区别?

R250中的R代表Red,偏红,R250属于慢染,脱色脱的完全,主要用于电泳染色
λmax=560―590nm.染色灵敏度比氨基黑高5倍.尤其适用于SDS电泳微量蛋白质染色.但蛋白质浓度超出一定范围时,对高浓度蛋白的染色不符合Beer定律,用作定量分析时要注意.
G250中的G就是Green,偏绿,G250属于快染,脱色脱的不彻底,主要用于蛋白测定
比考马斯亮蓝R250多二个甲基.;λmax=590―610nm.染色灵敏度不如R250,但比氨基黑高3倍.优点在于它在三氯乙酸中不溶而成胶体,能选择地染色蛋白而几乎无本底色.所以常用于需要重复性好和稳定的染色,适于作定量分析.