非特异蛋白结合，处理方法：在无血清培养液中裂解细胞； 在免疫沉淀前用protein (G/A)珠子预洗免疫沉淀后增加漂洗次数和严谨度（高盐或去垢剂），裂解液严谨度太低，处理方法：改用高严谨度裂解液，实验仪器或液体被污染，处理方法：使用洁净的仪器或液体转移膜上的非特异吸附，处理方法：戴手套， 用镊子夹取， 不要接触膜转移面。