内参也叫看家基因,在组织或细胞中都会表达,且表达量在不同组织或细胞中几乎是相同的,一般有α-Tublin ,β-actin ,GAPDH 等,在Western Blotting 中使用内参其实就是在WB 过程中的另外用内参对应的抗体检测内参。其作用有二:
1.是看提取蛋白质量的好坏。如果做western 的时候,内参照蛋白有条带,而目的蛋白没有,说明蛋白的提取和转膜等步骤没有问题,是目的蛋白的抗体质量不好或者是稀释倍数不对。
2.是比较客观的说明目的蛋白的表达情况,消除上样量等的误差。不同的样品之间由于蛋白提取的量有差别,可能强阳性的表达跑出来的带很弱。因此设立内参照,比较不同样品之间的表达情况。