50× TAE Buffer (pH8.5)
组份浓度 2M Tris-醋酸,100mM EDTA
配制量 1L
配制方法
1. 称量下列试剂,置于 1 L 烧杯中。 Tris 242 g;Na2EDTA· 2H2O 37.2 g
2.向烧杯中加入约 800 ml 的去离子水,充分搅拌溶解。
3. 加入 57.1 ml 的乙酸,充分搅拌。
4.加去离子水将溶液定容至 l L 后,室温保存。
10× TBE Buffer (pH8.3)
组份浓度 890 mM Tris-硼酸,20 mM EDTA
配制量 1L
配制方法
1. 称量下列试剂,置于 l L 烧杯中。
量 Tris 108 g ;Na2EDTA· 2H2O 7.44 g;硼酸 55 g
2.向烧杯中加入约 800 ml 的去离子水,充分搅拌溶解。
3.加去离子水将溶液定容至 l L 后,室温保存。
10× MOPS(3-吗啉基丙磺酸)Buffer
组份浓度 200 rnM MOPS,20 mM NaOAc,10 mM EDTA
配制量 1L
配制方法
1. 称 41.8 g MOPS,置于 1 L 烧杯中。
2.加约 700 ml DEPC 处理水,搅拌溶解。
3.使用 2 N NaOH 调节 pH 值至 7.0。
4.再向溶液中加入下列试剂。
1 M NaOAc(DEPC 处理)20 ml ; 0.5 M EDTA(pH8.0)(DEPC 处理) 20 ml。
5. 用 DEPC 处理水将溶液定容至 1 L。
6. 用 0.45 m 滤膜过滤除去杂质。
7. 室温避光保存。
注:溶液见光或高温灭菌后会变黄。变黄时也可使用,但变黑时不要使用。
溴乙锭 (10 mg/ml)
组份浓度 10 mg/ml 溴乙锭
配制量 100 ml
配制方法
1. 称量 1 g 溴乙锭,加入到 100 ml 容器中。
2.加入去离子水 100 ml,充分搅拌数 h 完全溶解溴乙锭。
3.将溶液转移至棕色瓶中,室温避光保存。
4.溴乙锭的工作浓度为 0.5 μg/ml。
注意:溴乙锭是一种致癌物质,必须小心操作。
Agarose 凝胶
配制方法
1. 配制适量的电泳及制胶用的缓冲液(通常是 0.5× TBE 或 1× TAE)。
2.根椐制胶量及凝胶浓度,准确称量琼脂糖粉,加入适当的锥形瓶中。
3. 加入一定量的电泳缓冲液(总液体量不宜超过锥形瓶的 50%容量)。
注:用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。
4. 在锥形瓶的瓶封上保鲜膜, 并在膜上扎些小孔, 然后在微波炉中加热熔化琼脂 糖。加热过程中,当溶液沸腾后,请戴上防热手套。小心摇动锥形瓶。使琼脂 糖充分均匀熔化。此操作重复数次,直至琼脂糖完全熔化。必须注意,在微波炉中加热时间不宜过长, 每次当溶液起泡沸腾时停止加热, 否则会引起溶液过 热暴沸,造成琼脂糖凝胶浓度不准,也会损坏微波炉。熔化琼脂糖时,必须保 证琼脂糖充分完全熔化,否则,会造成电泳图像模糊不清。
5. 使溶液冷却至 60℃左右,如需要可在此时加入溴乙锭溶液(终浓度 0.5 µ g/ml)。 并充分混匀。 注:溴乙锭是一种致癌物质。使用含有溴乙锭的溶液时,请戴好手套。
6. 将琼脂糖溶液倒入制胶模中, 然后在适当位置处插上梳子。 凝胶厚度 一般在 3~5 min
之间。
7. 在室温下使胶凝固(大约 30 min~1 h),然后放置于电泳槽中进行电泳。
注:凝胶不立即使用时,请用保鲜膜将凝胶包好后在 4℃下保存,一 般可保存 2~5 天。 琼脂糖凝胶浓度与线形 DNA 的最佳分辨范围
琼脂糖浓度 | 最佳线形DNA分辨范围(bp) |
0.5% | 1,000~30,000 |
0.7% | 800~12,000 |
1.0% | 500~10,000 |
1.2% | 400~7,000 |
1.5% | 200~3,000 |
2.0% | 50~2,000 |
6 × Loading Buffer(DNA 电泳用)
组份浓度 30 mM EDTA;36%(V/V) Glycerol;0.05%(W/V)Xylene Cyanol FF; 0.05%(W/V) Bromophenol Blue
配制量 500 ml
配制方法
1. 称量下列试剂,置于 500 ml 烧杯中。
EDTA 4.4g;Bromophenol Blue 250 mg;Xylene Cyanol FF 250 mg
2.向烧杯中加入约 200 ml 的去离子水后,加热搅拌充分溶解。
3.加入 180 ml 的甘油(Glycerol)后,使用 2 N NaOH 调节 pH 值至 7.0。
4.用去离子水定容至 500 ml 后,室温保存。
10 × Loading Buffer (RNA 电泳用)
组份浓度10 mM EDTA;50%(V/V) Glycerol;0.25%(W/V)Xylene Cyanol FF;0.25%(W/V) Bromophenol Blue
配制量 10ml
配制方法
1. 称量下列试剂,置于 10 ml 离心管中。
0.5 M EDTA(pH8.0) 200 µl;Bromophenol Blue 25 mg;Xylene Cyanol FF 25 mg
2.向离心管中加入约 4 ml 的 DEPC 处理水后,充分搅拌溶解。
3.加入 5 ml 的甘油(Glycerol)后,充分混匀。
4.用 DEPC 处理水定容至 10 ml 后,室温保存。