20× SSC
组份浓度 3.0 M NaCl，0.3 M Na3citrate· 2H2O(柠檬酸钠)
配制量 1L
配制方法
1.称量下列试剂，置于 l L 烧杯中。 NaCl 175.3 g； Na3citrate· 2H2O 88.2 g
2. 向烧杯中加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。
3.滴加 14 N HCl，调节 pH 值至 7.0 后，加去离子水将溶液定容至 1 L。
4.高温高压灭菌后，室温保存。
20× SSPE Buffer
组份浓度 3.0 M NaCl，0.2 M NaH2PO4，0.02 M EDTA
配制量 1.L
配制方法
1. 称量下列试剂，置于 l L 烧杯中。 NaCl 175.3 g；NaH2PO4· H2O 27.6 g ；Na2EDTA· 2H2O 7.4 g
2.向烧杯中加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 加 NaOH 调节 pH 值至 7.4(约 6.5 ml 的 10 N NaOH)。
4.加去离子水将溶液定容至 l L。
5.高温高压灭菌后，室温保存。
50 X Denhardt’S 溶液
组份浓度 1%(W/V) Ficoll 400(菲可 400/水溶性聚蔗糖 400)；1%(W/V) Polyvinylpyrrolidone (聚维酮/聚乙烯吡咯烷酮)； 1%(W/V) BSA
配制量 500 ml
配制方法
1.称量下列试剂，置于 500 ml 烧杯中。
Flcoll 400 5g；PoLyvlnylpyrrolldone 5g；BSA 5g
2.加去离子水约 400 ml，充分搅拌溶解
3.加去离子水将溶液定容至 500 ml。
4.用 0.45µm 滤膜过滤后，分装成每份 25 ml。
5.-20℃保存。
0.5 M 磷酸盐 Buffer
组份浓度 0.5M Na2HPO4
配制量 1L
配制方法
1.称量 134 g Na2HPO4· 7H2O 置于 l L 烧杯中。
2.加入约 800 ml 的去离子水充分搅拌溶解。
3.加入 85%的 H3PO4(浓磷酸)调节溶液 pH 值至 7.2。
4.加去离子水定容至1L。
5.-20℃保存。
Salmon DNA (鲑鱼精 DNA)
组份浓度 10 mg/ml Salmon DNA
配制量 约 100 ml
配制方法
1. 称取鲑鱼精 DNA 2 g 置于 500 ml 烧杯中，加入约 200 ml 的 TE Buffer。
2.用磁力搅拌器室温搅拌 2~4 h，溶解后加入 4 ml 的 5 M NaCl，使其终浓度为 0.1 M。
3. 用苯酚和苯酚/氯仿各抽提 1 次。
4.回收水相溶液后， 使用 17 号皮下注射针头快速吸打溶液约 20 次， 以 DNA。
5. 加入 2 倍体积的预冷乙醇进行乙醇沉淀。
6.离心回收 DNA 后，溶解于 100 ml 的去离子水中，测定溶液的 OD260 值。
7. 计算溶液的 DNA 浓度后，稀释 DNA 溶液至 10 mg/ml。
8.煮沸 10min 后，分装成小份(1 ml/份)。-20℃保存。
9.使用前在沸水浴中加热 5min 后，迅速冰浴冷却。
DNA 变性缓冲液
组份浓度 1.5 M NaCl，0.5 M NaOH
配制量 1L
配制方法
1. 称量下列试剂，置于 l L 烧杯中。 NaCl 87.7 g；NaOH 20 g
2.向烧杯中加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。
3.加去离子水将溶液定容至 l L 后，室温保存。
预杂交液/杂交液 (DNA 杂交用)
组份浓度 6× SSC(或 SSPE)；5× Denhardt’s；0.5%(W/V) SDS；100 µ g/ml Salmon DNA
配制置 100 ml
配制方法
1. 称量下列试剂，置于 200 ml 烧杯中。 20× SSC(或 SSPE) 30 ml；50×Denhardt’s 10 ml；10% SDS 5 ml；10 mg/ml Salmon DNA 1 ml；dH2O 54 ml
2.充分混匀后，使用 0.45 µ m 滤膜滤去杂质后使用。
预杂交液/杂交液(RNA 杂交用)
组份浓度 6× SSC(或 SSPE)；5× Denhardt’s；0.5%(W/V) SDS；100 µ g/ml Salmon DNA；50%(V/V) Formamide
配制量 100 ml
配制方法
1. 称量下列试剂，置于 200 ml 烧杯中。 20× SSC(或 SSPE) 30 ml；50×Denhardt’s 10 ml；10% SDS 5 ml；10 mg/ml Salmon DNA 1 ml；Formamide 50ml；dH2O 4 ml
2.充分混匀后，使用 0.45µm 滤膜滤去杂质后使用。
膜转移缓冲液(Western 杂交用)
组份浓度 9 mM Glycine，48 mM Tris，0.037%(W/V)SDS，20%(V/V)甲醇
配制量 1L
配制方法
1. 称量下列试剂，置于 l L 烧杯中。 Glycine 2.9 g；Tris 5.8 g；SDS 0.37 g
2.向烧杯中加入约 600 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。
3.加去离子水将溶液定溶至 800 ml 后，加入 200 ml 的甲醇。
4.室温保存。
TBST Buffer(Western 杂交膜清洗液)
组份浓度 20 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，0.05%(V/V)Tween 20
配制量 1L
配制方法
1.称量下列试剂，置于 l L 烧杯中。 NaCl 8.8 g；1 M Tris-HCl(pH8.0) 20 ml
2.向烧杯中加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。
3.加入 0.5 ml Tween 20 后充分混匀。 加去离子水将溶液定容至 l L 后，4℃保存。
封闭缓冲液(Western 杂交用)
组份浓度 5%(W/V)脱脂奶粉/TBST Buffer
配制量 100ml
配制方法
1.称 5 g 脱脂奶粉加入到 100 ml TBST Buffer 中，充分搅拌溶解。
2.4℃保存待用(本封闭液应该现配现用)。
